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Rapport d'absorbance très élevé 260/230 d'un échantillon d'ARN


Après mon extraction d'ARN la plus récente, les échantillons d'ARN avaient des rapports d'absorbance très élevés de 260/230 (allant de 5 à 25).

Je n'ai jamais eu de chiffres comme celui-ci et je sais que le rapport est censé être d'environ 2 en général.

Quelle pourrait être la raison d'une absorbance si élevée de 260/230 ?


Gergana a raison sur les effets de l'isothiocyanate de guanidine, mais pas sur les détails. L'isothiocyanate de guanidine absorbe fortement à 260 et PAS 230 (le hcl de guanidine est celui qui absorbe fortement à 230). En tant que tel, si votre ARN est fortement contaminé par l'isothiocyanate de guanidine, qui est utilisé dans au moins un tampon dans à peu près tous les kits de préparation d'ARN, votre 260/230 sera beaucoup plus gros que 2 (la "concentration" sera également artificiellement élevée Donc, si vous obtenez un 260/230 sur 25 et que vous avez une "concentration" de "1000 ng/µL", vous pouvez en fait avoir moins de 200 ng/µL d'ARN et une tonne d'isothiocyanate de guanidine, tout secouant.)


Le rapport 260/230 vous donne une idée des contaminants dans votre échantillon. L'isothiocyanate de guanidine, qui est généralement utilisé pour l'isolement de l'ARN, absorbe à 230 nm, c'est peut-être ce que vous voyez. Mais une autre explication pourrait être que votre échantillon est très dilué (combien d'ARN avez-vous obtenu ?), de sorte que votre A260 est également très faible. Il serait alors difficile de mesurer avec précision A230, ce qui entraînerait des ratios 260/230 surestimés.